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如何避免PCR实验室出现污染，有哪些办法

发布时间： 2021-11-01　　点击次数： 1543次

　　PCR实验室又叫基因扩增实验室，由于PCR检测因其高灵敏度、快速、操作方便等优势已经被广泛应用，不过正是由于它灵敏度*，极微量的污染源都有可能导致检测结果的假阳性，因此，如何避免以及处理实验室污染，对PCR人来说是一门必修课。
　　
　　一、样本间交叉污染：
　　
　　主要是在采（取）样的过程中，由于取样工具之间的交叉造成污染；或者在核酸提取的过程中，由于移液器、离心管等使用不当导致的污染。
　　
　　二、PCR试剂的污染：
　　
　　主要是在PCR试剂配制过程中，由于移液器、容器、阴性对照及其它试剂被核酸模板或阳性对照污染。
　　
　　三、克隆质粒的污染：
　　
　　在PCR实验室操作中经常会用到阳性参考品，这些阳性参考品大多数是由某些克隆质粒制作而成，克隆质粒在单位容积内浓度高，不小心使用很容易造成污染。
　　
　　四、PCR扩增产物污染
　　
　　这是PCR反应中主要常见的污染问题。因为PCR产物拷贝量大，远远高于PCR检测数个拷贝的极限，所以极微量的PCR产物污染，就可造成假阳性结果。还有一种容易忽视，可能造成PCR产物污染的形式是气溶胶污染，在空气与液体面摩擦时就可形成气溶胶，据计算一个气溶胶颗粒可含4.8万拷贝，因而由其造成的污染是一个值得特别重视的问题。
　　
　　污染消除判断标准：
　　
　　设计阴性对照组，根据阴性对照确认污染情况。可使用敞开后隔夜放置操作区的阴性对照进行实验（在单独的PCR实验室验证），若连续三天阴性对照没有起跳，则说明污染得到控制，可恢复正常实验。

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